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凱氏定氮儀對蛋白質含量的測量步驟

更新時間:2017-10-23  |  點擊率:1658
   凱氏定氮儀對蛋白質含量的測量步驟
  凱氏定氮儀是對生活中的含有蛋白質的東西進行測量的。粗蛋白是衡量飼料原料、飼料產品zui重要的指標之一。粗蛋白在化驗室的檢測頻率zui高。“粗蛋白”的測定是用凱氏定氮儀測定的,即在崔化劑的作用下,用硫酸在高溫下使樣品中的有機物分解、脫水,使蛋白質和氨化物轉變成無機態氨和濃硫酸生成硫酸鐵;硫酸鐵在強堿作用下,經蒸餾放出氨氣,經冷凝的液態氨被硼酸吸收生成四硼酸按,用標準酸滴定以確定樣品中的含氮量,所測含氮量乘以6.25,即為樣品中粗蛋白的含量。反應過程分為消化、蒸餾、滴定三步。蛋白質測定儀即是根據以上原理設計而成的。
  凱氏定氮儀是測定食品中蛋白質含量的經典方法,測定結果穩定,準確。其中凱氏定氮儀、蛋白質測定儀都是利用凱氏定氮法設計的,但是全自動蛋白質測定儀價格昂貴,目前尚難普及。而相應的凱氏定氮儀卻得到了相關人士的認可。因為相較于全自動蛋白質測定儀,凱氏定氮儀的性價比更高,而且其測定結果與標準法測定無顯著差異。
  凱氏定氮儀作為蛋白質含量測定的*儀器,具有不可撼動的地位。用凱氏定氮儀測定蛋白質含量,其步驟如下:
  1.樣品消解:準確稱取0·5~2·0 g混勻固體樣品或吸取5·0~10·0 ml液體樣品于干凈的消化管內,加0·5 ~1·0 g硒粉或10 g硫酸鉀+1 g硫酸銅, 10ml硫酸,搖勻,加10 ml過氧化氫,混勻,將消化管放入消化器,放上裝好密封圈的排污管,打開抽氣三通進水,使抽氣三通處于吸汽狀態。接通電源,進行消化,如遇難消化的奶粉等樣品,可于消化過程中適當增加過氧化氫的加入量,至消化液呈透明藍綠色液體,關閉電源,冷卻,定容至100 ml。此過程約需1~2 h。
  2.測定:打開電源,按儀器說明書調試凱氏定氮儀進入待機狀態(約0·5 min)。把裝有50 ml硼酸溶液及2~3滴指示液的三角瓶放到接收托盤上,接收管插入液面,再將內裝適量消化樣品的消化管放到蒸餾器上,加20 ml純水及消化時硫酸5倍量的氫氧化鈉液,打開蒸汽開關進行蒸餾。當流出液至150 ml左右時下移接收瓶,使接收管脫離液面,用純水沖洗接收管,繼續蒸餾0·5 min,結束。取下消化管,關掉蒸汽開關,凱氏定氮儀還原到待機狀態。餾出液用0·0500 mol/L的鹽酸標準溶液滴定至淡紫色為終點,計算蛋白質含量。同時做試劑空白實驗。
  與粗蛋白測定儀相比,凱氏定氮儀只是較后者少了消化爐,而其測定結果能夠滿足實驗室的需求。因此,凱氏定氮儀在很多地方都得到了認可。
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